分光光度計的限制性條件主要表現(xiàn)為；通過溶液的光必須是平行的；通過溶液的光必須是單色光；待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個前提條件。

　　但是在實(shí)際的分光光度計的制造和使用過程中這三個條件是不可能達(dá)到的。其一：因為光是直線傳播的，在分光光度計制造過程中，燈源發(fā)出的光是發(fā)散的，經(jīng)過聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過溶液的整體過程中，光是不可能平行的。其二：燈源發(fā)出的光是復(fù)合光，經(jīng)過狹縫，再經(jīng)過光柵分光等步驟，因為受到狹縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達(dá)到純單色光。還有光度計的整體設(shè)計問題，光度計不可能沒有其它的雜光存在。其三：用戶的溶液也不可能是純凈的，也會含有一些雜質(zhì)，這些對光度的吸收都會存在影響。除以上三個方面的影響外，在實(shí)際的光度計應(yīng)用過程中還會存在其他因素的影響，例如：

　　1、經(jīng)過比色皿的光是否垂直；

　　2、比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值；

　　3、測試波長是否準(zhǔn)確；

　　4、程序設(shè)計是否存在漏洞等等，都會直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結(jié)果。